脑性瘫痪(CP)是由脑发育缺陷或非进行性脑损伤所致，常发生在2岁以下小儿中，发病率约1~3%。儿童痉挛性脑瘫常表现为肌肉无力、痉挛、选择性运动控制丧失，以及原发性脑损伤导致的姿势控制受损。

       在临床上，脑瘫患儿通常表现出动态马蹄足，存在膝关节过伸、过度扩张、三头肌群收缩缺失等问题。临床上尚未发现根治CP的方法，虽然替代药物经常被使用，但并未发现有效证据支持其使用，一般是通过康复性治疗、药物和手术来改善患儿运动功能。

       本研究使用脂多糖(LPS)与缺氧/缺血(H/I)联合诱导建立CP大鼠模型，采用液相色谱-串联质谱(LC-MS /MS)联合tmt-标签定量方法探讨白脉软膏对CP大鼠脑损伤的治疗作用。

       大鼠随机分为4组，每组10只(5只雄性，5只雌性)，分别为白脉软膏组、安慰剂组、模型组和对照组。在白脉软膏组大鼠背部的皮肤表面(从第7天到第40天)局部涂抹奇正白脉软膏1.5mL/只/日；在安慰剂组CP大鼠组背部皮肤表面局部涂抹安慰剂1.5mL/天(从第7天至第40天)。

       同时，研究人员要在上午8~11时评估大鼠的运动能力，从出生后30~40天每5天进行一次旋转测试，测试系列以40rpm的速度进行一系列测试，记录了每只大鼠的坠落时间。最后，收集其血清、海马和运动皮层样本进行指标检测。

01 CP大鼠蛋白质的质谱定量分析

       LC-MS/MS对海马体的分析显示，共有2551种蛋白质含有2种或更多独特的肽；在运动皮层中，共发现2521种蛋白质，其中2种或2种以上为独特的肽。在本研究中，海马中发现了1397种改变的蛋白质，其中582个蛋白在安慰剂组大鼠中表达下调(与正常对照组相比)，而在白脉软膏组大鼠中表达上调(与安慰剂组相比)，还有815个蛋白表现出相反的趋势。在大脑皮层中，发现了1843种改变的蛋白质，其中564个蛋白在对照组中表达下调，而在白脉软膏组中表达上调(与安慰剂组CP大鼠相比)，1279种蛋白质表现出相反的趋势。

02利用生物信息学分析预测CP大鼠海马蛋白功能分类

       通过信号通路对海马体的1397个改变的蛋白质和运动皮层的1843个改变的蛋白质进行了分析，发现CP组间表达蛋白和下调蛋白的富集分数最高。在已识别的通路中，最热门的是海马区细胞质核糖体蛋白、gpcr-C类代谢谷氨酸、信息素和胆固醇代谢通路(图1)，以及运动皮质区丝裂原活化激酶(MAPK)信号通路和胆固醇代谢通路(图1)。

       有趣的是，在海马体和运动皮层中，与对照组健康大鼠相比，在安慰剂组CP大鼠中，各种胆固醇代谢途径的催化酶的表达上调，与安慰剂组CP大鼠(图1)相比，白脉软膏组各种胆固醇代谢途径的催化酶的表达下调。同时，胆固醇合成途径中的Hmgcs1、Idi1和sql催化酶也发生了类似的改变。运动皮质中只有Mvd、Fdps和Dhcr7发生改变，而海马中没有。与安慰剂组CP大鼠相比，白脉软膏组CP大鼠Rps6ka1表达明显降低。同样，第40S核糖核糖核糖蛋白RPS8、RPS9、RPS25和RPS27的表达也受到了控制。

       与对照组健康大鼠相比，Grm4表达在用安慰剂组CP大鼠中明显上调，与安慰剂组的CP大鼠相比，白脉软膏组CP大鼠Grm4表达明显下调。与对照组相比，安慰剂组CP大鼠的上述蛋白表达水平下降，而白脉软膏组CP大鼠的上述蛋白表达水平上升。

       这些结果表明，MAPK通路的关键蛋白质受到白脉软膏治疗的影响。

03免疫化学染色

       使用免疫组化法定位大鼠海马中CP相关蛋白的表达(图2)，与对照组相比，在安慰剂CP大鼠中，组蛋白3.3和组蛋白4的表达被下调。然而，与对照组和安慰剂组相比，白脉组CP大鼠组蛋白3.3和组蛋白4表达上调。与对照组相比，模型组CP大鼠和安慰剂组CP大鼠的PKC-δ和外周蛋白表达上调；然而，与对照组和安慰剂组相比白脉治疗组CP大鼠的PKC-δ和周围蛋白表达下调。

       使用高通量定量蛋白质组方法，评估在脂多糖(LPS)与缺氧/缺血(H/I)联合诱导的CP大鼠模型中海马和运动皮层的蛋白组学变化。在每个大脑区域都发现了2000多种蛋白质。定量分析显示，LPS和H/I诱导之后除了运动系统的破坏外，海马和运动皮层蛋白质组的也发生了严重的紊乱。

       相比之下，白脉软膏的局部应用不仅缓解了CP大鼠模型的运动缺陷，而且恢复了大脑皮层的蛋白质组。此外，在白脉处理的CP大鼠大脑中，海马中的星形胶质细胞被强烈激活，这与神经营养因子的增加有关。

       蛋白质组学分析表明，CP模型可诱导大脑神经炎症反应，而局部应用白脉软膏的则逆转了这一反应。本研究突出了海马和运动皮层神经元在CP进展和治疗中的意外作用，从而为CP提供了潜在的新治疗靶点。